Clonage d'orchidée par hampe florale

Clonage par hampe florale

Le clonage permettra d'obtenir à l'identique, la plante utilisée pour cette opération. C'est utile si vous désirez conserver une souche particulière mais cette opération est délicate.

Mes recommandations

Ne tentez pas le clonage si :

• Vous n'avez jamais fais de culture in vitro

• Vous débutez dans la culture in vitro

• Vous n'avez pas de floraison

• La hampe choisit pour cette opération est coupée depuis plus de 48h

• La hampe présente des signes de faiblesses : maladie, ridée, etc...

• La plante est contaminée par un virus

Vous pouvez tenter le clonage si :

• vous êtes à l'aise avec la culture in vitro

• vous maîtrisez les floraisons et refloraisons de vos plantes

• la hampe choisit présente toutes les caractéristiques nécessaires pour un bon clonage

1 – Préparez votre milieu en mélangeant le KOFF MEDIA4 (contient de l'agar-agar) + charbon dans 1 litre d'eau.

2 – Stérilisez votre préparation à l'aide des fiches présentent sur le site

3 - Retirer de la hampe les fleurs ouvertes s'il en reste. Il faut choisir une hampe florale propre, saine et vigoureuse, avec des bourgeons terminaux formés. Les hampes qui donnent les meilleurs résultats, sont celles dont seules les premières fleurs sont ouvertes. Évitez les vieilles hampes fanées.

4 - Bien rincer la hampe sous l'eau courante pendant 5 minutes.

5 - Préparer une solution d'eau de javel diluée à 10% et y ajouter 2 à 3 gouttes d'additif.

6 - Découper la hampe en portion comprenant chacune un nœud, à l'aide d'une lame de rasoir ou d'un scalpel. Chaque portion devrait faire 12 à 20 mm, en conservant environ 6mm au dessus et en dessous du nœud.

7 - Laisser tremper durant 15 minutes les morceaux ainsi préparés dans la solution d'eau de javel réalisée à l'étape 3, en agitant régulièrement toutes les 2-3 minutes.

8 - Après ce laps de temps, sortir les portions de hampe de la javel (que l'on peut jeter) et retirer précautionneusement les bractées qui protègent les bourgeons dormants, de façon aseptique.

9 - Préparer une nouvelle  solution de javel, diluée à 5% cette fois-ci, et y ajouter 2-3 gouttes d'additif.

10 - Une fois débarrassées de leur bractée, plonger les tiges dans la solution de javel à 5% . Baigner 10 minutes en agitant régulièrement, toutes les 2-3 minutes.

11 - Ce laps de temps écoulé, sortir les tiges de l'eau de javel et les longer dans de l'eau stérile, bien remuer puis vider. Répéter cette étape 3 fois (3 bains différents avec une eau renouvelée).

12 - Supprimer encore 3mm de tige, devant et après le bourgeon, en utilisant un scalpel

13 - On transfère alors les sections ainsi obtenues dans des récipients à culture, préparés avec du Orchid Multiplication Medium. D'autres milieux peuvent cependant être tentés (P748, B141, B142). Planter la portion la plus longue de la tige dans le milieu, en la penchant légèrement, de façon à ce que le bourgeon affleure la surface. De cette façon, la future pousse pointera normalement vers le haut en émergeant. 

14 - Dans la plupart des cas, les nouvelles pousses devraient apparaître en un mois et sont normalement prêts à être repiquées eu bout de 60 jours.

15 - ouvent, les nœuds rejettent de l'acide phénolique dans le milieu qui devient foncé à la base de la tige. Cet acide est toxique pour la jeune pousse qu'il faudra alors repiquer dans un milieu neuf faute de la voir périr. L'utilisation d'un milieu contenant du charbon actif réduit la fréquence des repiquages car le charbon absorbe et détruit les composés phénoliques.

16 - Repiquer dans un milieu de maintenance (Orchid Maintenance Medium P748 ou BM-1/B141 or BM- 2/ B142) et laisser la plantule croître et développer son système racinaire. Les racines apparaissent généralement après le développement des 2-3 premières feuilles.

Toutes les étapes de 5 à 16 se feront en glove-box stérile. Pour la stérilisation de celle-ci, merci de consulter les fiches précédentes