Choix et préparation des milieux de culture

Choix et préparation des milieux de culture (MAJ 07/03/2020)

Avant de préparer votre milieu, il faudra déjà déterminer celui dont vous aurez besoin suivant vos cultures. Vous trouverez ci-dessous un récapitulatif théorique vous permettant de choisir :

Orchidées Epithytes

 Orchidées terrestres

Certains nécessiteront l'ajout d'agar agar (7g pour 1 litre) à vérifier dans la composition du produit.

Une fois  votre milieu de culture sélectionné, passons à la préparation  de celui-ci.

Retrouvez l'intégralité des produits sur notre site!

Préparation du milieu de culture

1. Préparation du milieu :

On prépare généralement le milieu de culture une semaine à l’avance, afin de vérifier que les contenants n’ont pas été contaminés lors de leur préparation. La préparation est identique, quel que soit le milieu choisi.
C’est un peu comme une recette de cuisine : 
a) Dans une grande casserole, versez 1L d’eau distillée, d’eau déminéralisée ou d’eau osmosée. Faire chauffer jusqu’à ce que l’eau bouille. Baissez alors le feu, pour faire cesser l’ébullition mais garder l’eau bien chaude (frémissante)
b) Attention : Si le milieu contient déjà de l’agar, passer directement à l’étape c.
Verser l’agar dans la casserole et agitez au fouet régulièrement jusqu’à ce que le mélange redevienne limpide (10 minutes environ). Il faut compter une dose de 7 grammes d’agar pour 1L de milieu de culture.
c) Versez précautionneusement le sachet de media dans la casserole, car la poudre est très volatile et pourrait se répandre facilement en cas de geste inadapté.
d) Laisser chauffer sans faire bouillir, en fouettant régulièrement durant 10 à 15 minutes au moins.
e) Sortez du feu et versez le milieu dans votre tuperware, environ 1cm d’épaisseur par contenant (avec une seringue, c’est plus facile)
f) Percez les couvercles d'un trou d'1mm de diamètre et placcez un morceau de bande micropore. Mettez le couvercle une fois redroidit complètement.

2. Stérilisation des tuperwares :

a) Les tuperwares sont placés dans le panier vapeur de la cocotte-minute, dans laquelle on a versé préalablement une hauteur d’eau d’environ 1 cm. 
b) Fermez la cocotte-minute et mettez-là sur feu vif
c) Lorsque la cocotte se met siffler, baissez le feu de façon à ce que la soupape chuchote gentiment et comptez alors 24 minutes de « cuisson »
d) Les 24 minutes écoulées, coupez le feu, (ou sortir la cocotte de la plaque si votre cuisinière est électrique) et laissez retomber complètement la pression et refroidir complètement la cocotte avant de l’ouvrir
e) Sortez-les de la cocotte minute. En refroidissant, le milieu gélosé se solidifie. Filmez-les avec le cellophane de façon à ne pas laisser l’air rentrer. Ils peuvent être déformés en sortant de la cocotte minute mais ils reprendront leur forme initiale après refroidissement.
Au bout de deux heures, stockez les vos contenants à température ambiante, à l’abri des chocs (buffet, étagère, etc.) On peut également les conserver au réfrigérateur si on ne souhaite pas les utiliser avant plusieurs semaines.
f) Au bout de trois ou quatre jours, vérifiez-les pour d’éventuelles contaminations. Ecartez tous ceux qui vous sembleraient douteux (dépôt blanchâtre, mousse, etc.…)

Exemple de contamination

Stérilisation des Microbox

La stérilisation de ces boîtes se fera avec une mèche placée dans un coin et couvercle fermé aux 3 autres coins. Placez les boîtes et lancer le feu de façon à ce que la pression monte lentement.

Après 25 minutes de cuisson, laissez la pression redescendre et ouvez votre cocotte.

Enlevez les bandelette et fermez le dernier coin.